Trypsinisaatio on solujen dissosiaatioprosessi, jossa käytetään trypsiiniä, proteolyyttistä entsyymiä, joka hajottaa proteiineja kiinnittyneiden solujen erottamiseksi suonesta, jossa niitä viljellään. Kun trypsiini lisätään soluviljelmään, se hajottaa proteiinit, jotka mahdollistavat solujen kiinnittymisen suoneen.
Miksi trypsinoimme soluja?
Trypsinointi tehdään usein, jotta sallitaan solujen kulkeutuminen uuteen säiliöön, tarkkailu kokeellista varten tai konfluenssiasteen vähentäminen pullossa poistamalla tietty prosenttiosuus solut.
Kuinka trypsiini poistaa solut?
Trypsiini/EDTA on yhdistetty menetelmä solujen irrottamiseen. Trypsiini leikkaa adheesioproteiinit solu-solu- ja solu-matriisivuorovaikutuksissa leikkaamalla adheesioproteiinien aminohapot spesifisesti lysiinistä tai aginiinista C-päässä, jos ylävirran aminohappo ei ole proliinia.
Kuinka saat trypsinoituja kiinnittyviä soluja?
Toimenpide
- Poista elatusaine viljelyastiasta aspiroimalla ja pese yksikerros suolaliuoksella, jossa ei ole Ca2+ ja Mg 2+ poistaaksesi kaikki seerumijäämät. …
- Annostele trypsiiniä tai trypsiini/EDTA-liuosta viljelyastiaan (astioihin) niin, että solujen yksikerros peittyy kokonaan, ja aseta se 37 °C:n inkubaattoriin ~2 minuutiksi.
Kuinka trypsiini poistetaan käytöstä soluviljelmässä?
Kun solut näkyvät irti, lisää 2 osaaesilämmitettyä täydellistä kasvualustaatrypsiinin inaktivoimiseksi. Levitä väliaine varovasti pipeteillä solukerroksen pinnalle useita kertoja varmistaaksesi, että >95 % soluista saadaan t alteen. Seerumittomille viljelmille soijapavun trypsiini-inhibiittori (tuotenumero
