Mitä suurempi molekyylipaino, sitä pidempi kela ja sitä hitaammin molekyyli kulkee. Joten elektroforeesi + SDS erottuu molekyylipainon perusteella, ei natiivin varauksen perusteella. Tärkeä huomautus: Samanpituisia proteiineja ei yleensä voida erottaa geelielektroforeesilla + SDS.
Kuinka erotat saman molekyylipainon omaavat proteiinit?
Sentrifugointi, elektroforeesi ja kromatografia ovat yleisimpiä tekniikoita proteiinien puhdistamiseen ja analysointiin. Sentrifugointi erottaa proteiinit niiden sedimentaationopeuden perusteella, johon vaikuttaa niiden massa ja muoto.
Millä tekniikoilla proteiinit erotetaan latauksen perusteella?
Proteiinit voidaan erottaa niiden nettovarauksen perusteella ioninvaihtokromatografialla. Jos proteiinilla on positiivinen nettovaraus pH:ssa 7, se yleensä sitoutuu karboksylaattiryhmiä sisältävään helmien pylvääseen, kun taas negatiivisesti varautuneella proteiinilla ei (kuva 4.4).
Mikä seuraavista tekniikoista soveltuu parhaiten proteiinien erottamiseen molekyylipainon perusteella?
Ositukseen perustuvat kromatografiamenetelmät ovat erittäin tehokkaita pienten molekyylien erottamisessa ja tunnistamisessa aminohappoina, hiilihydraatteina ja rasvahappoina. Kuitenkin affiniteettikromatografiat (eli ioninvaihtokromatografia) ovat tehokkaampia makromolekyylien, kuten nukleiinihappojen ja proteiinien, erottamisessa.
Mikä saraketyyppikromatografia erottaa proteiinit molekyylipainon perusteella?
Geelisuodatus (GF) -kromatografia erottaa proteiinit yksinomaan molekyylikoon perusteella. Erotus saadaan aikaan käyttämällä huokoista matriisia, johon molekyyleillä on steerisistä syistä erilainen pääsy - eli pienemmillä molekyyleillä on parempi pääsy ja suuremmat molekyylit suljetaan pois matriisista.
